在生物医学领域,二甲基亚砜(DMSO)广泛应用于高GC含量模板的扩增。其可能的机制在于DMSO能够改善高GC含量DNA的构象,降低其二级结构,从而促进聚合酶在二级结构区域的延伸。此外,DMSO在聚合酶链式反应(PCR)中也能显著提高特异性,帮助扩增一些难以获取的模板。当反应体系中加入DMSO时,可以适当降低退火温度,进一步提升反应效果。
然而,在实际应用中,PCR反应常常由于多种原因出现失败,这通常表现为两个主要问题:一是目的模板扩增量不足,二是非目的基因扩增过多。为了解决这些问题,研究人员通常会在反应体系中添加合适的添加剂。这些添加剂主要作用于降低基因的二级结构或减少非特异性启动。
以下是一些常用的添加剂及其作用:
- DMSO、非离子性洗涤剂、甜菜碱:这些添加剂能够显著降低DNA的二级结构,提升扩增效率。
- 甲酰胺、四甲基氯化铵(TMAC):这些化合物有助于降低非特异性的启动,提高PCR的准确性。
- 镁离子:镁离子是聚合酶反应中不可或缺的辅因子,对于反应的顺利进行至关重要。
- 牛血清白蛋白:该蛋白质可以有效减少污染物的干扰,提高实验的可靠性。
在选择合适的添加剂时,南宫28NG相信品牌力量,我们提倡使用高品质的试剂和材料,以确保实验结果的准确性与可靠性。通过合理搭配和应用这些添加剂,可以有效改善PCR的反应效率,实现更加精准的基因扩增和分析。