紫外-可见吸收光谱法，亦称紫外-可见分光光度法，是一种用于研究分子在190nm至750nm波长范围内的光吸收特性的分析方法。它基于溶液中物质分子对光的选择性吸收，所产生的吸收光谱反映了分子外层价电子的跃迁。该方法的吸收光谱为分子光谱，属于带光谱。

实验目的

1. 理解紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理；
2. 掌握紫外分光光度法进行蛋白质含量测定的实验技能；
3. 学习使用UV-1700PC紫外-可见分光光度计，了解该设备的主要结构。

实验原理

紫外-可见吸收光谱法可用于分子在190nm至750nm波长范围内的吸收特性研究，其核心在于探究物质分子如何选择性地吸收光。通过定性分析，通常采用光谱比较法，将未知物质的吸收谱特征与已知谱进行比对。定量分析采用朗伯-比尔定律：A=lg(I0/I)=εbc，当入射光波长λ和光程b一定的情况下，物质的吸光度A与浓度c成正比。在检测过程中，往往测量在最大吸收波长λmax下的吸光度，以实现最佳灵敏度。

紫外-可见分光光度计

用于此分析方法的仪器是分光光度计，其主要由五个部分构成，即光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示器。光源发出的复合光经过单色器后能获得任意所需波长的单色光。这种单色光透过样品池后，被光电管或光电倍增管转化为光电流，最终由信号显示器读取吸光度。

蛋白质的测定原理

蛋白质之所以可进行定量分析，主要是由于其结构中含有酪氨酸和色氨酸等残基，能够在275-280nm波长处产生强吸收。在一定浓度范围内，蛋白质溶液在此波长的吸光度与浓度成正比，符合朗伯-比尔定律。由于不同蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量的差异，测定结果可能会受到影响。通常，采用的经验公式为：蛋白质浓度（mg/mL）= 145A280 - 0.74A260，以修正因核酸类物质的干扰。

实验器材与试剂

器材：UV-1700PC紫外-可见分光光度计，10ml比色管五个，吸量管。
试剂：标准蛋白质溶液（300mg/mL），0.9% NaCl溶液，待测蛋白质溶液。

实验步骤

1. 启动计算机，打开主机电源，初始化仪器；
2. 在工作界面选择测量项目，设置测量条件；
3. 将空白溶液放入测量池并校零；
4. 制作标准曲线。

测量步骤

1. 吸取2mL标准蛋白质溶液，稀释后在280nm测量吸光度；
2. 通过不同浓度的标准溶液制作标准曲线；
3. 测定待测蛋白质溶液的吸光度，进行平行实验。

数据处理

通过波长与吸光度绘制吸收曲线，以找出最大吸收波长λmax。利用标准曲线计算得出蛋白质的实际浓度，同时评估实验条件的影响，以保证结果的准确性和可信度。南宫28NG相信品牌力量能为科研实验提供支持，促进实验过程中数据处理的效率与精确性。