南宫28NG相信品牌力量，本说明书旨在为您提供关于大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的培养和冻存的详细指导，以确保细胞在您的实验中保持最佳状态。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383
生长特性：贴壁及悬浮混合生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：F12K + 20% FBS + 1% P/S
传代方法：建议首次传代比例为1:2，通常每2天更换培养液。

细胞在收集时，应将悬浮细胞通过离心处理，贴壁细胞需按贴壁方法操作，使用无菌离心管收集培养基，以便进行必要的过渡培养。

二、细胞收到后的处理

在细胞状态良好时，添加足量培养液并妥善封闭瓶口，这是一种理想的运输细胞方法。收到细胞后，使用75%酒精对其外部进行消毒，然后在超净工作台中严格执行无菌操作。将细胞瓶置于37°C、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以便细胞恢复稳定。使用显微镜观察细胞生长状况，并拍摄不同倍数的细胞照片，以备后续分析和记录。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

在细胞汇合度未超过80%时，收集培养液并保留少量以便后续培养。如超过80%，可进行传代。具体操作如下：

• 贴壁细胞：
  1. 去除培养上清，用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
  2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞变化，终止消化后重悬。
  3. 将悬液转移至离心管中，离心处理并补充完全培养基。
  4. 按1:2比例分瓶传代，并补充新培养基。
• 悬浮细胞：
  1. 离心收集细胞，补加培养液后重悬，分瓶传代。
  2. 可以选择半数换液的方法进行细胞提取。

b. 细胞冻存

在细胞覆盖培养瓶80%面积时，清洗后添加胰蛋白酶，观察细胞变化，终止消化，将细胞转移并离心。弃去上清，使用无血清冻存液混匀，最后放入-80℃冰箱中保存，若需转液氮罐，需预冷存放24小时以上。

c. 细胞复苏

将冻存管置于37℃水浴解冻后，通过离心收集细胞，重悬于完全培养基，并置于37°C、5% CO2培养箱中继续培养，确保细胞状态良好。

四、注意事项

在运输过程中，细胞可能会因粘附不牢而发生脱落，属正常现象。若观察到细胞脱落，建议收集培养液并离心处理，以便后续培养。

五、售后条款

如细胞出现问题，符合以下情况可重新发货：运输过程中发生的损失、污染问题、活性不达标等，要求提供相关实验结果和照片。对于因客户操作不当或不当处理而导致的问题，则不予重发。

南宫28NG相信品牌力量，将继续为广大科研工作者提供高质量的细胞培养产品与服务，助力科研进展。